TRANSFORMASI DAN EKSPRESI pET-ENDO-β-1,4-XILANASE DALAM Escherichia coli BL21

Abstract

Transformasi dan Ekspresi pET-endo-β-1,4-xilanase dalam Escherichia coli BL21; Eka Yuni Kurniawati, 101810301003; 2014: 46 halaman; Jurusan Kimia FMIPA Universitas Jember.

Isolasi pET-Endo dari E. coli TOP10 dilakukan dengan metode alkali lisis (Sambrook et al., 1989). Alkali lisis merupakan metode isolasi DNA plasmid dimana proses pemecahan membran sel bakteri menggunakan SDS (Sodium Dedosil Sulfat) dalam suasana basa. Elektroforegram menunjukkan pET-Endo berhasil diisolasi dengan ukuran 6022 bp. pET-Endo yang telah berhasil diisolasi kemudian ditransformasikan dalam sel kompeten E. coli BL21. Metode transformasi yang digunakan adalah heat shock. Keberhasilan transformasi dapat diketahui menggunakan uji resistensi antibiotik. Antibiotik yang digunakan adalah kanamisin karena pET-Endo mengandung gen yang resisten terhadap kanamisin. Hasil uji resistensi antibiotik dari transformasi pET-Endo menunjukkan terdapat koloni transforman E. coli BL21 yang tumbuh pada media padat yang mengandung kanamisin. Hasil uji resistensi antibiotik dari kontrol menunjukkan bahwa E. coli BL21 tidak tumbuh pada media padat yang mengandung kanamisin dan tumbuh pada media padat yang tidak mengandung kanamisin. Berdasarkan hasil tersebut maka dapat dinyatakan transformasi pET-Endo ke E. coli BL21 berhasil. Kurva pertumbuhan transforman E. coli BL21 menunjukkan Fase log berlangsung pada 2 sampai 4 jam setelah inkubasi. E. coli BL21 mengalami pertumbuhan secara cepat pada fase log. Ketika bakteri berada pada fase inilah waktu yang tepat untuk menambahkan IPTG untuk eskpresi gen dan menghasilkan protein. Protein endo-β-1,4-xilanase rekombinan telah berhasil diekspresikan dengan berat molekul sekitar 30 kDa dan aktivitas spesifik sebesar 0,762 U/mg. viii PRAKATA

Puji syukur ke hadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karunia-Nya sehingga penelitian ini dapat terselesaikan dengan judul “Transformasi dan Ekspresi pET-endo-β-1,4-xilanase dalam Escherichia coli BL21”. Skripsi ini disusun guna menyelesaikan pendidikan strata satu (S1) pada jurusan Kimia Fakultas MIPA. Penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis menyampaikan terima kasih kepada: 1. Prof. Drs. Kusno, DEA, Ph.D selaku Dekan Fakultas MIPA Universitas Jember dan Dr. Bambang Piluharto, S.Si., M.Si, selaku ketua jurusan Kimia FMIPA Universitas Jember sekaligus Dosen Pembimbing Akademik penulis. 2. Dr. A. A. I. Ratnadewi, S.Si., M.Si dan Agung Budi Santoso, S.Si., M.Si selaku dosen pembimbing skripsi yang telah banyak membantu penulis menyelesaikan skripsi/tugas akhir. 3. drh. Wuryanti Handayani, M.Si dan Ika Oktavianawati, S.Si., M.Sc selaku dosen penguji skripsi yang telah memberikan banyak kritik dan saran untuk menyempurnakan skripsi/tugas akhir ini. 4. Prof. Bambang Sugiharto selaku ketua CDAST dan Prof. Tri Agus Siswoyo selaku ketua divisi Nutraceutical. 5. Orang tua, ibunda Fatmawati dan Ayahanda Mu’i Rianto yang selalu memberi semangat dan dukungan baik secara moril maupun materiil, serta pengorbanannya selama membesarkan dan membimbing saya selama ini. 6. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu. Penulis menerima segala kritik dan saran dari semua pihak demi kesempurnaan skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pembaca.