Purifikasi dan Uji Aktivitas Antiprotease SLPI Rekombinan Domain C (SLPIc)

Abstract

Secretory Leukocyte Protease Inhibitor (SLPI) merupakan protein nonglikosilasi yang berpotensi untuk dikembangkan sebagai terapi antiprotease pada pasien PPOK. SLPI terdiri dari dua domain, yaitu domain N-terminal dan domain C-terminal. Domain C-terminal merupakan domain yang memiliki aktivitas antiprotease. SLPIc rekombinan telah terekspresikan pada plasmid pGEX-4T-2 pada bakteri E. coli BL21(DE3). Penelitian ini bertujuan untuk melakukan purifikasi dan uji aktivitas antiprotease terhadap SLPIc rekombinan yang telah terekspresikan dalam plasmid pGEX-4T-2 tersebut. Pemurnian dilakukan menggunakan teknik kromatografi afinitas ion logam amobil dengan resin Ni-NTA. Elusi protein yang terikat pada resin dilakukan menggunakan imidazol dengan konsentrasi yang bertingkat dari 200-500 mM. SLPIc rekombinan berhasil dimurnikan yang ditandai dengan didapatkanya pita protein tunggal berukuran ~32 kDa. Konsentrasi protein pada fraksi elusi 4 dengan metode Bradford adalah 972 ± 32,787 µg/mL dan dengan metode SDS PAGE adalah 624 ng/µL. Konsentrasi protein pada fraksi elusi 6 dengan metode Bradford adalah 542 ± 55,000 µg/mL dan dengan metode SDS PAGE adalah 307 µg/mL. Uji aktivitas antiprotease SLPIc rekombinan dilakukan menggunakan enzim kimotripsin dan media Skim Milk Agar (SMA). Hidrolisis molekul protein yang terkandung dalam susu skim oleh enzim kimotripsin ditunjukkan dengan terbentuknya zona bening pada media SMA. Fraksi elusi 4 SLPIc rekombinan dengan perbandingan volume reaksi 1:100 (enzim kimotripsin:fraksi elusi 4) dapat menghambat aktivitas enzim kimotripsin secara sempurna. Namun, fraksi elusi 6 dengan perbandingan volume yang sama masih belum dapat menghambat aktivitas dari enzim kimotripsin.