Kloning Dan Transformasi Gen Spesifik Serralysin (Serfj) Dari Serratia Marcescens Ke Dalam Vektor Pgem-T Easy

Abstract

Demam berdarah merupakan penyakit yang disebabkan oleh virus dengue dengan vektor Aedes aegypti yang kemampuan transmisinya dipengaruhi oleh mikrobiota dalam tubuh nyamuk tersebut. Serratia marcescens yang diisolasi dari Aedes aegypti, diprediksi memiliki kemampuan untuk mensekresikan Serralysin protease yang diduga dapat menghambat pertumbuhan DENV pada vektor. Kelompok Riset kami (KeRis Vektor), berhasil mengisolasi Serratia marcescens strain smsb OR801069 dari midgut Aedes aegypti. Amplifikasi gen spesifik serralysin (serfj) berbasis PCR juga telah dilakukan dan menghasilkan gen serfj yang kompatibel. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan klon rekombinan gen serfj dengan pGEM-T Easy sebagai vektor kloningnya sebagai salah satu usaha konservasi gen target. Tahap yang dilakukan meliputi kloning, transformasi, blue-white screening, isolasi plasmid, dan konfirmasi keberhasilan kloning dengan restriksi. Hasil kloning yang telah berhasil dilakukan ditunjukkan dengan keberadaan koloni putih yang mengandung plasmid pGEM-T-serfj. Keberadaan plasmid tersebut dibuktikan oleh hasil visualisasi DNA isolasi plasmid yang menunjukkan >1 pita plasmid superkoil dengan panjang masing-masing 2500-3000 bp, 8000-10.000 bp, dan >10.000 bp. Keberadaan gen target (serfj) dalam pGEM-T-serfj dikonfirmasi dengan visualisasi DNA hasil restriksi menggunakan EcoRI dan XhoI yang menunjukkan dua pita gen dengan panjang ±1500 bp dan ±3000 bp. Hasil tersebut relevan dengan ukuran gen Serralysin yaitu sebesar 1515 bp dan plasmid pGEM-T Easy Vector sebesar 3015 bp. Berdasarkan data-data tersebut, disimpulkan bahwa kloning gen serfj ke dalam vektor pGEM-T Easy telah berhasil dilakukan.