Produksi Protein Rekombinan Sucrose Transporter Melalui Overekspresi cDNA-SoSUT1 pada Sel Bakteri E. coli Untuk Pembuatan Antibodi

Abstract

Sucrose transporter (SUT) merupakan salah satu protein kunci dalam proses transporasi sukrosa dari daun ke organ lainnya, sehingga keberadaan protein SUT ini sangat menarik untuk dipelajari. Berbagai metode untuk mempelajari mekanisme transportasi sukrosa, yang salah satunya menggunakan metode immunologi (western blot). Metode imunologi membutuhkan antibodi protein SUT yang diperoleh dengan memasukan/menginjeksikan protein SUT kedalam tubuh kelinci di bawah permukaan kulit (subkutan). Produksi protein SUT menggunakan fragmen cDNA-SoSUT1 telah dikonstruksi dalam vektor plasmid ekspresi pET28a untuk memproduksi protein rekombinan dalam bakteri Escherichia coli strain Bl 21. Protein rekombinan SUT1 diisolasi dan dipurifikasi menggunakan NiTA resin yang mengandung 6 Histidin, protein murni digunakan sebagai antigen dalam pembuatan antibodi poliklonal SUT1. Protein SUT hasil purifikasi kemudian diinjeksikan kedalam tubuh kelinci agar antibodi SUT1 dapat terbentuk. Analisis terbentuknya antibodi dilakukan dengan menguji darah kelinci setiap minggu, dengan metode Oukterloni. Antibodi yang telah terbentuk, selanjutnya diujikan secara langsung ke tanaman. Hasil penelitian menunjukan bahwa cDNA-SoSUT1 satu dapat diekspresikan dalam bakteri E. coli dan hasil ekspresi berupa protein dapat membentuk antibodi dalam tubuh kelinci, serta antibodi yang terbentuk mampu bereaksi dengan antigen SUT yang ada didalam tanaman.