Analisis Ifn-𝛄� dan IL-4 pada Mencit (mus Musculus) Balb/C Pasca Sensitisasi dengan Protein Imunogenik 56 Kd dari Kelenjar Saliva Aedes Aegypti L.

Abstract

Demam Berdarah Dengue (DBD) merupakan penyakit yang disebabkan oleh virus dengue, yang termasuk dalam genus Flavivirus dan Famili Flaviridae. Ae. aegypti merupakan vektor primer penyebab penyakit DBD. Strategi pengendalian vektor dalam mencegah epidemi dengue masih kurang berhasil dalam pelaksanaannya. Oleh karena itu, strategi melawan dengue perlu dikembangkan lebih jauh melalui pemahaman tentang mekanisme dan molekul yang terlibat dalam siklus transmisi virus dengue. Salah satu komponen tubuh vektor yang memiliki peran penting pada proses transmisi virus dengue adalah kelenjar saliva. Telah diketahui bahwa saliva vektor Ae. aegypti mengandung protein imunogenik 31 kD dan 56 kD yang diduga dapat memodulasi respon imun inang terhadap paparan gigitan nyamuk. Paparan saliva vektor Ae. aegypti akan memodulasi respon imun inang ke arah yang lebih protektif. Adanya protein imunogenik tersebut akan memunculkan respon imun adaptif yang dapat menghasilkan antibodi. Respon imun inang akan mengalami perubahan dari subset T helper 1 (Th1) ke arah subset T helper 2 (Th2) yang ditandai dengan menurunnya kadar IFN-γ dan meningkatnya kadar IL-4. Pada penelitian ini akan dianalisis konsentrasi sitokin Th1 (IFN-γ) dan sitokin Th2 (IL-4) untuk melihat respon imun hewan coba mencit (Mus musculus) BALB/c pasca dilakukan sensitisasi dengan protein 56 kD. Metode yang digunakan dalam penelitian ini antara lain rearing Aedes aegypti, preparasi sampel dan isolasi kelenjar saliva Aedes aegypti, analisis profil protein menggunakan SDS-PAGE, purifikasi pita gel protein melalui proses elektroelusi dan dialisis, perlakuan pada hewan coba, dan pengukuran konsentrasi sitokin IFN-γ dan IL-4. Hewan coba dibagi menjadi tiga kelompok yaitu kelompok A yang dijadikan kelompok kontrol diinjeksi dengan 0,05 M Tris-Cl pH 6,8,kelompok B diinjeksi dengan adjuvant dan kelompok C diinjeksi dengan protein 56 kD (0,1 μg/μl) dari kelenjar saliva Aedes aegypti + adjuvant (1:1). Proses sensitisasi dilakukan setiap dua minggu sekali selama enam minggu. Setiap dua minggu sekali dilakukan pengambilan darah pada bagian sinus orbitalis mata hewan coba. Darah yang telah diambil kemudian disentrifugasi untuk mendapatkan serum darah yang akan digunakan dalam analisis konsentrasi sitokin. Konsentrasi sitokin IFN-γ dan IL-4 dianalisis dengan menggunakan ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) dan dibaca menggunakan ELISA reader pada panjang gelombang 450 nm. Hasil yang didapatkan dari penelitian ini menunjukkan bahwa pada kelompok C yang disensitisasi dengan protein 56 kD dari kelenjar saliva Aedes aegypti + adjuvant memiliki konsentrasi sitokin IFN-γ yang menurun dan konsentrasi sitokin IL-4 yang meningkat seiring dengan semakin lama paparan dari ekstrak protein 56 kD yang diberikan. Sedangkan kelompok A dan kelompok B menunjukkan kecenderungan yang sama antara konsentrasi sitokin IFN-γ dan IL-4 pada saat sebelum disensitisasi dan setelah diberi perlakuan. Konsentrasi sitokin IFN-γ yang menurun dan konsentrasi sitokin IL-4 yang meningkat pada kelompok C menunjukkan bahwa adanya paparan berulang dari ekstrak protein 56 kD dari kelenjar saliva Aedes aegypti terbukti mampu meningkatkan respon imun adaptif, yaitu perubahan dari subset T helper 1 (Th1) ke arah subset T helper 2 (Th2) pada hewan coba mencit (Mus musculus) BALB/c.