PEMURNIAN DAN KARAKTERISASI ENDO-β-1,4-D-XILANASE REKOMBINAN

Abstract

Pemurnian dan Karakterisasi Endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan Endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan adalah enzim intraseluler yang dapat menghidrolisis xilan menjadi xilooligosakarida dan sedikit xilosa. Endo-β-1,4-Dxilanase

rekombinan dalam penelitian ini diperoleh dari pET-Endo dalam Escherichia coli BL21 DE3 dengan gen asal dari Bacillus sp. yang diisolasi dari sistem abdomen rayap tanah. Endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan dapat diaplikasikan dalam industri makanan, misalnya dalam industri gula digunakan untuk menghidrolisis xilan menjadi gula xilosa yang dapat dikonsumsi oleh penderita diabetes. Industri non makanan, seperti industri kertas memanfaatkan endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan untuk menghilangkan hemiselulosa dalam proses bleaching sehingga mengurangi penggunaan klorin atau klorin dioksida pada proses bleaching tersebut. Penggunaan endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan dalam bidang industri makanan dan non makanan membutuhkan endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan dalam jumlah banyak, murni dan memiliki karakteristik spesifik. Pemurnian endoβ-1,4-D-xilanase

rekombinan dalam penelitian ini dilakukan secara kromatografi afinitas dengan resin Ni-NTA. Karakterisasi yang dilakukan meliputi pH dan suhu optimum, stabilitas pH dan suhu serta pengaruh kation logam , Cu 2+ , Zn 2+ dan Fe 3+

xilanase rekombinan dengan berat molekul 30 kDa secara kromatografi afinitas dengan resin Ni-NTA ialah 10 kali lebih murni dari ekstrak kasar endo-β-1,4-Dxilanase rekombinan. Endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan pada penelitian ini vii + , Na + , Mg 2+ memiliki pH optimum 4.6 dan suhu optimum 40 viii o C. Aktivitas endo-β-1,4-Dxilanase rekombinan paling stabil pada pH 4 hingga waktu pre-inkubasi 120 menit dengan aktivitas relatifnya sebesar 83% dan stabil pada suhu 30 - 40 C selama waktu pre-inkubasi 80 menit dengan aktivitas relatif lebih dari 50%. Penambahan senyawa kimia yang mengandung K + dan Na + dapat meningkatkan aktivitas endoβ-1,4-D-xilanase rekombinan, sedangkan penambahan Mg menurunkan aktivitas endo-β-1,4-D-xilanase rekombinan.