TRANSFORMASI GEN SoSUT1 MENGGUNAKAN VEKTOR Agrobacterium tumefaciens PADA TANAMAN TOMAT PRODUK REKAYASA GENETIKA (PRG) Event 4.1

Abstract

Proses transformasi gen SoSUT1 menggunakan vektor Agrobacterium tumefaciens strain GV3101 pAct-SoSUT1 terdiri dari beberapa tahapan yaitu konfirmasi keberadaan pAct-SoSUT1 pada Agrobacterium tumefaciens, persiapan eksplan, infeksi, kokultivasi, eliminasi dan seleksi tanaman putatif transforman. Agrobacterium tumefaciens yang digunakan dalam transformasi perlu dikonfirmasi untuk membuktikan bahwa bakteri tersebut telah tersisipi oleh pAct- SoSUT1 sehingga dapat digunakan sebagai vektor dalam proses transformasi. Konfirmasi dilakukan dengan isolasi DNA plasmid kemudian dilanjutkan dengan analisis PCR menggunakan primer 1F/1R hptII untuk mendeteksi keberadaan gen hptII pada pAct-SoSUT1. DNA hasil amplifikasi PCR kemudian dielektroforesis dan dibandingkan dengan marker 1 kb Ladder, diperoleh pita berukuran ± 470 bp, sesuai dengan panjang DNA hptII. Hasil tersebut menunjukkan bahwa konstruk plasmid pActviii SoSUT1 telah berhasil terinsersi ke dalam sel bakteri Agrobacterium tumefaciens dan dapat dijadikan vektor dalam transformasi menggunakan eksplan tunas tomat yang berumur 14 hari. Persentase planlet yang mampu bertahan hingga media seleksi 5 yaitu transformasi ke-1 0%, transformasi ke-2 0%, transformasi ke-3 6 %. Dari proses transformasi diperoleh tanaman putatif transforman sebanyak 6 tanaman putatif transforman.