PRODUKSI PROTEIN REKOMBINAN SUCROSE TRANSPORTER MELALUI OVEREKSPRESI cDNA-SoSUT1 PADA SEL BAKTERI Escherichia coli STRAIN BL21

Abstract

Sucrose transporter protein merupakan suatu protein yang berperan dalam translokasi sukrosa secara aktif di dalam jaringan tanaman. Protein sucrose transporter berperan sebagai penentu besarnya sukrosa yang dapat diakumulasi pada tanaman. Protein SUT (Sucrose transporter) berdasarkan homologinya diklasifikasikan menjadi tiga famili antara lain seperti SUT1, SUT2 dan SUT4. Perbedaan dari ketiga famili protein SUT berdasarkan afinitas substrat dan fungsi masing-masing SUT. SUT1 memiliki afinitas yang tinggi tetapi daya muat pengangkutannya rendah. Overekspresi gen SUT1 merupakan salah satu cara untuk meningkatkan translokasi dan akumulasi sukrosa pada tanaman. Hal ini dapat diamati dengan melihat karakterisasi ekspresi protein rekombinan SUT1. Oleh karena produksi, isolasi dan purifikasi dari sel tanaman secara langsung tidak mudah, maka karakterisasi protein SUT1 dapat dilakukan dengan menggunakan organisme model. Tersedianya fragmen cDNA-SoSUT1 yang disisipkan ke dalam vektor ekspresi pET28a dan ditransformasikan ke dalam bakteri Escherichia coli strain BL21, digunakan untuk produksi protein rekombinan SUT1. Pada penelitian ini akan dilakukan optimasi kondisi ekspresi protein rekombinan SUT1, produksi dan purifikasi protein rekombinan SUT1. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konstruk plasmid pET28a-SoSUT1 berhasil dikonfirmasi keberdaannya dengan analisis enzim restriksi dan PCR di dalam Escherichia coli strain BL21. Pengujian ekspresi protein rekombinan SUT1 dapat diekspresikan dengan penambahan 1 mM IPTG dan suhu induksi 37ºC. Selanjutnya dilakukan produksi protein rekombianan SUT1. Protein rekombinan SUT1 yang telah diperoleh dipurifikasi dengan menggunakan Ni-NTA resin, dengan konsentrasi 5,75 mg yang berasal sari 2,5 L biakain Escherichia coli BL21 yang telah tersisipi pET28a-SoSUT1.