TRANSFORMASI GEN SoSPS1 PADA TANAMAN TEBU (Saccharumoffcinarum L. var. BL) OVEREKSPRESI GEN SoSUT1 EVENT 2 MENGGUNAKAN Agrobacterium tumefaciens

Abstract

Transformasi genetik pada tanaman adalah suatu upaya memasukkan gen target yang diisolasi dari suatu organisme ke dalam sel tanaman. Metode transformasi secara tidak langsung menggunakan A. tumefaciens lebih sering digunakan karena dapat dilakukan dengan peralatan laboratorium yang sederhana serta jumlah copy gen yang diintegrasikan ke genomik tanaman berjumlah sedikit. SoSPS1 adalah cDNA/gen yang menyandikan protein SPS Pada penelitian sebelumnya, telah diperoleh tanaman tebu (Saccharumofficinarum L. var. BL) overekspresi gen SoSUT1. Namun demikian, pada tebu transgenik tersebut tidak terjadi peningkatan biosintesis sukrosa. Oleh karena itu diperlukan overekspresi gen SoSPS1 pada tanaman tebu overekspresi gen SoSUT1 agar terjadi peningkatan baik biosintesis maupun translokasi sukrosa sehingga dapat meningkatkan kandungan sukrosa pada batang tanaman tebu. Dalam penelitian ini dilakukan transformasi gen SoSPS1 pada tanaman tebu overekspresi gen SoSUT1menggunakan A. tumefaciens. Tujuan penelitian ini untuk mendapatkan tanaman tebu transforman overekspresi ganda yaitu gen SoSPS1 dan gen SoSUT1. Metode yang digunakan dalam penelitian ini meliputi persiapan eksplan untuk transformasi, kultur A. tumefaciens, isolasi DNA plasmid dan PCR, infeksi A. tumefaciens pada eksplan, ko-kultivasi, eliminasi A. tumefaciens, seleksi eksplan putative transforman, aklimatisasi, isolasi DNA genom tanaman putative transforman, dan analisis Polymerase Chain Reaction (PCR.) Hasil penelitian menunjukkan bahwa berdasarkan hasil analisis PCR diperoleh tanaman tebu yang positif overekspresi ganda gen SoSUT1 dan gen SoSPS1 sebanyak 4 tanaman (yang berasal dari 1 tanaman) pada transformasi ke-1 (1,81%.).3 tanaman pada transformasi ke-2 (4,84%). dan 4 tanaman pada transformasi ke-3 (7,14%) Efektivitas rata- rata transformasi gen SoSPS1 menggunakan A. tumefaciens yang mengandung konstruk plasmid pCL4-SoSPS1 dan dikendalikan oleh promoter RUBQ2 pada tanaman tebu overekspresi gen SoSUT1 sebesar 4,59%. Keberadaan fragment DNA hptII sebesar 470 bp dan DNA nptII sebesar 550 bp hasil PCR menunjukkan integrasi konstruk pCL4-SoSPS1 pada genom tebu transforman sehingga dapat dikatakan sebagai tanaman tebu transgenik overekspresi ganda gen SoSUT1 dan gen SoSPS1.