PROFIL SDS-PAGE OUTER MEMBRANE PROTEIN Porphyromonas gingivalis (Penelitian Observasional Analitik in vitro)

Abstract

Porphyromonas gingivalis mendominasi daerah poket periodontal pada penderita Aggressive periodontitis. P.gingivalis merusak jaringan dengan interaksi langsung antara bakteri dan sel inang. Kemampuan bakteri untuk melekat pada sel inang diperantarai oleh molekul adhesi yang terdapat pada bakteri dan reseptor yang terdapat pada sel inang. Molekul adhesi bakteri bisa terletak di pili atau outer membrane protein (OMP). P.gingivalis memiliki OMP yang mampu secara langsung menembus jaringan inang. OMP memegang peranan penting dalam pertumbuhan koloni, pembentukan biofilm, dan perkembangan penyakit periodontal. Sebagai dasar untuk mencegah terjadinya penyakit periodontal maka dilakukan pengamatan terlebih dahulu terhadap bakteri penyebab penyakit periodontal tersebut yaitu P. gingivalis, dalam penelitian ini yang akan diamati adalah OMP dari P. gingivalis ATCC 33277. Deteksi OMP P. gingivalis dapat digunakan sebagai indikator atau prediktor untuk perkembangan Aggressive periodontitis. Tujuan penelitian ini adalah untuk menganalisis profil OMP P.gingivalis ATCC 33277. Salah satu cara untuk mengetahui profil OMP adalah dengan metode Sodium Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE). Sebelum mengisolasi OMP dilakukan pemotongan pili dari bakteri P.gingivalis. Pili dipotong dengan omnimikser kecepatan penuh selama 60 detik dengan suhu 4 0 C, diulang sampai 3 kali. Hasilnya dilakukan sentrifugasi selama 30 menit dengan kecepatan 12.000 rpm, didapatkan supernatant yang merupakan pilli bakteri dan pelletnya kemudian dapat dilakukan isolasi OMP. Pellet diresuspensi dengan PBS kemudian ditambahkan n-octyl β-D-glucopyranoside (NOG) dan dilakukan homogenisasi dengan vortek, kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm selama 2 x 30 menit. Supernatant dan pellet dipisahkan yang mana supernatant merupakan OMP dengan 1 kali NOG. Dilakukan penambahan NOG lagi pada pellet dan disentrifugasi dengan kecepatan 12.000 rpm selama 30 menit dan didapatkan supernatant kedua yang merupakan OMP dengan 2 kali NOG. Dari hasil isolasi OMP dengan 1 kali NOG dan OMP dengan 2 kali NOG keduanya sama-sama dipresipitasi untuk didapatkan konsentrasi yang cukup pekat sebelum di uji SDS- vii PAGE. Hasil SDS-PAGE OMP dengan 1 kali NOG terpresipitasi dibandingkan dengan OMP dengan 2 kali NOG terpresipitasi. Sedangkan OMP dengan 2 kali NOG terpresipitasi dibandingkan dengan OMP dengan 2 kali NOG tanpa presipitasi.

Berdasarkan hasil SDS-PAGE dengan pewarnaan Perak Nitrat (AgNO ), profil OMP dengan 1 kali NOG terpresipitasi didapatkan sepuluh pita protein yang teridentifikasi yaitu 143 kDa, 100 kDa, 70 kDa, 50 kDa, 40 kDa, 37 kDa, 35 kDa, 31,1 kDa, 21 kDa, dan 18 kDa sedangkan pada OMP dengan 2 kali NOG terpresipitasi didapatkan lima pita protein yang teridentifikasi yaitu 104 kDa, 53 kDa, 50 kDa, 48 kDa, dan 40 kDa. OMP dengan 2 kali NOG tanpa presipitasi didapatkan empat pita protein yang teridentifikasi yaitu 104 kDa, 53 kDa, 48 kDa dan 40 kDa sedangkan pada OMP ke 2 dengan presipitasi didapatkan lima pita protein yang teridentifikasi yaitu 104 kDa, 53 kDa, 50 kDa, 48 kDa, dan 40 kDa. Profil OMP P.gingivalis berkisar antara 18 kDa sampai 143 kDa. Terdapat satu pita protein yaitu 40 kDa yang sama pada OMP P.gingivalis baik dengan satu kali pemberian NOG maupun dua kali pemberian NOG dan dengan presipitasi maupun tanpa presipitasi. Hal ini menunjukkan OMP P.gingivalis memiliki protein dengan berat molekul 40 kDa yang lebih banyak. Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk mengetahui peranan yang lebih besar mengenai faktor virulensi terkait pita protein tertentu yang teridentifikasi terkait dengan perkembangan Aggressive periodontitis.