Purifikasi Protein Rekombinan Kandidat Vaksin Tuberkulosis Multi-Epitope MTP_Ag85a Dengan Kromatografi Afinitas

Abstract

Tuberkulosis (TB) tetap menjadi salah satu penyebab utama kematian akibat penyakit menular di seluruh dunia, yang disebabkan oleh *Mycobacterium tuberculosis*. Meskipun *Bacillus Calmette-Guérin* (BCG) merupakan satu-satunya vaksin berlisensi yang tersedia saat ini, vaksin tersebut hanya memberikan perlindungan terbatas terhadap TB paru pada orang dewasa dan lebih memicu imunitas sistemik dibandingkan imunitas mukosal. Vaksin subunit multi-epitop muncul sebagai alternatif yang menjanjikan, dengan menggabungkan epitop sel B dan sel T yang imunogenik dari *Mycobacterium tuberculosis curli pili* (MTP) serta Antigen 85A (Ag85A) ke dalam satu protein fusi, yaitu MEMTP_Ag85A. Protein rekombinan ini, yang sebelumnya diekspresikan dalam *Escherichia coli* BL21 (DE3) yang membawa plasmid pET-30a, memerlukan proses pemurnian untuk menghilangkan kontaminan protein sel inang sebelum dilakukan evaluasi imunologis lebih lanjut. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan kondisi pemurnian optimal bagi MEMTP_Ag85A menggunakan kromatografi afinitas Ni-NTA pada sistem *Fast Protein Liquid Chromatography* (FPLC), menganalisis profil pita protein hasil pemurnian melalui SDS-PAGE, mengonfirmasi identitasnya melalui *Western Blot*, serta mengukur konsentrasi total protein menggunakan metode *Bradford assay*. Pemurnian dilakukan dengan kolom HisTrap 5 mL menggunakan elusi gradien imidazol linear sebesar 20–500 mM selama 10 volume kolom dengan laju alir 5 mL/menit. Hasil penelitian menunjukkan keberhasilan pemurnian MEMTP_Ag85A, yang ditandai dengan munculnya satu pita dominan pada kisaran berat molekul 31,6–32 kDa dalam fraksi elusi 31 hingga 33, yang bersesuaian dengan rentang konsentrasi imidazol 393–417 mM. Pengukuran dengan *Bradford assay* menunjukkan konsentrasi protein tertinggi terdapat pada fraksi 31 (314,20 µg/mL), yang kemudian menurun secara bertahap pada fraksi 32 (124,22 µg/mL) dan fraksi 33 (97,84 µg/mL). Analisis *Western Blot* menggunakan antibodi *rabbit anti-His-tag* menunjukkan pita positif yang konsisten pada berat molekul yang sama, sehingga mengonfirmasi identitas protein rekombinan yang telah dimurnikan tersebut. Temuan ini menunjukkan bahwa strategi pemurnian yang diterapkan berhasil menghasilkan MEMTP_Ag85A dengan tingkat kemurnian tinggi, yang mendukung potensinya untuk evaluasi imunogenisitas lebih lanjut sebagai kandidat vaksin tuberkulosis berbasis epitop.