Cloning of Serralysin Gene (serf) from Serratia marcescens Into Expression Vector pET

Abstract

Penelitian ini bertujuan untuk mengkloning gen serralysin (serf) dari Serratia marcescens ke dalam vektor ekspresi pET dengan menggunakan analisis bioinformatika untuk memastikan integritas dan orientasi gen yang tepat. Gen serralysin diamplifikasi menggunakan primer yang telah dirancang secara spesifik dan dianalisis menggunakan perangkat lunak SnapGene untuk memverifikasi urutan dan orientasi gen. Setelah kloning dilakukan dengan enzim restriksi EcoRI dan XhoI, plasmid yang mengandung gen serralysin diekspresikan dalam Escherichia coli. Hasil analisis sekuensing menunjukkan bahwa gen serralysin berhasil dimasukkan ke dalam pET vektor dengan orientasi yang benar dan tanpa adanya mutasi atau perubahan urutan yang tidak diinginkan. Pencocokan sekuen dengan data GenBank melalui BLAST mengonfirmasi bahwa gen yang dikloning memiliki identitas 100% dengan gen serralysin dari Serratia marcescens. Penelitian ini menunjukkan bahwa pendekatan bioinformatika yang digunakan untuk menganalisis gen dan vektor ekspresi sangat penting untuk memastikan keberhasilan kloning dan ekspresi protein dalam penelitian lebih lanjut.