Cloning and Transformation of Serralysin Gene (ser) from Serratia marcescens into pGEM-T Easy Vector

Abstract

Demam berdarah merupakan penyakit yang ditularkan oleh nyamuk dengan prevalensi tinggi dan signifikan di Indonesia. Melalui proses Blood feeding, Ae. aegypti menyebarkan virus DENV. Bakteri simbiotik yang terdapat pada nyamuk memiliki beberapa fungsi penting dalam tubuh nyamuk, seperti Serratia marescens. S. marcescens memproduksi Serralysin. Serralysin telah terbukti mengurangi dan menghambat perkembangan Plasmodium. Serralysin disekresikan oleh S. marcescens yang diisolasi dari Ae. aegypti diperkirakan mempunyai efek patogenik pada Plasmodium sp. yang sama terhadap DENV. Untuk mempelajari efek patogenik serralysin terhadap DENV pada S. marcescens, langkah pertama adalah mengamplifikasi gen yang diinginkan dan mengkloning gen serralysin (ser) untuk preservasi. Kloning gen bakteri merupakan strategi penting untuk menjaga keragaman genetik bakteri dan memastikan kesinambungan signifikansinya. Sistem vektor pGEM-T Easy banyak digunakan untuk melestarikan dan menyimpan gen tertentu. Bakteri yang ditransformasi ditumbuhkan ke dalam media dengan ampisilin, IPTG, dan X-gal sehingga menghasilkan hasil skrining berwarna biru- putih. Koloni yang diharapkan tumbuh adalah koloni berwarna putih. Plasmid dimurnikan dan dibatasi dengan enzim restriksi EcoRI dan XhoI. Pita ganda sekitar 1500 bp menunjukkan bahwa plasmid telah berhasil dipotong di situs restriksi EcoRI dan XhoI, dan gen serralysin (ser) telah dimasukkan ke dalam plasmid.