Aktivitas Trombolitik Fraksi Protein 67 kDa Kelenjar Saliva Aedes albopictus

Abstract

Fraksi protein 67 kDa pada kelenjar saliva Ae. albopictus diduga apirase, yaitu protein saliva yang berperan dalam proses blood-feeding dengan menghambat agregasi platelet melalui hidrolisis ATP dan ADP menjadi AMP serta fosfat anorganik. Aktivitas tersebut menyebabkan berkurangnya penempelan antar platelet sehingga pembentukan trombus dapat dicegah. Dugaan fungsi apirase menjadikan fraksi 67 kDa menarik untuk diteliti sebagai kandidat yang berpotensi sebagai agen trombolitik. Metode yang digunakan dalam penelitian diawali dengan landing dan rearing nyamuk Ae. albopictus, dilanjutkan identifikasi spesies berdasarkan karakter morfologi. Kelenjar saliva nyamuk betina diisolasi menggunakan teknik mikrodiseksi, kemudian protein saliva diekstraksi dan dipisahkan berdasarkan berat molekulnya menggunakan metode SDS-PAGE untuk memperoleh pita protein target 67 kDa. Fraksi protein tersebut dimurnikan melalui elektroelusi dan dialisis. Selanjutnya dilakukan uji proteolitik menggunakan media Skim Milk Agar dengan metode sumuran dan langsung (tetes) sebagai skrining awal aktivitas trombolitik. Selanjutnya uji aktivitas trombolitik dilakukan dengan metode fibrin plate assay. Hasil identifikasi menunjukkan spesies Ae. albopictus ditandai dengan adanya garis sisik putih memanjang pada mesonotum (medium longitudinal line), kumpulan sisik putih pada mesepimeron (white scale patches), serta bagian anterior midfemur yang berwarna hitam tanpa garis putih. Hasil isolasi kelenjar saliva menunjukkan bahwa Ae. albopictus memiliki sepasang kelenjar saliva yang tersusun atas dua lobus lateral dan satu lobus medial. Analisis profil protein menggunakan SDS-PAGE menunjukkan adanya beberapa pita protein dengan rentang berat molekul 13–101 kDa, pita protein target terlihat jelas pada berat molekul 67 kD. Pita protein dikumpulkan sebanyak 385 potongan pita, lalu dipurifikasi menggunakan metode elektroelusi dan dialisis hingga diperoleh konsentrasi protein sebesar 3,39 µg/µL. Hasil uji proteolitik menunjukkan bahwa fraksi protein 67 kDa tidak menghasilkan zona bening pada media Skim Milk Agar, sehingga mengindikasikan tidak adanya aktivitas proteolitik dan tidak diuji lanjut pada uji aktivitas trombolitik