Tranformasi Gen Pengkode Protein Heptapeptida Pada Tanaman Tembakau (Nicotiana Tabacum)

Abstract

Transformasi gen pada tanaman merupakan suatu metode untuk menyisipkan dan mengintegrasikan gen asing ke dalam sel tanaman untuk memproduksi dan memperbanyak protein rekombinan dengan menggunakan tanaman target sebagai bio-factory. Tembakau dipilih sebagai bio-factory untuk perbanyakan protein rekombinan dikarenakan biomassa dan kandungan proteinnya yang tinggi. Bakteri Agrobacterium tumefaciens digunakan sebagai vektor transformasi gen dikarenakan kemampuan Agrobacterium untuk mengintegrasikan T-DNA pada sel tanaman yang memungkinkan untuk menginduksi terbentuknya gen target pada tanaman. Penelitian dilaksanakan untuk mengetahui apakah gen target yang telah dikontruksikan pada plasmid A. tumefaciens dapat ditransformasikan pada kalus tembakau. Prosedur penelitian meliputi sterilisasi benih, induksi kalus, konfirmasi keberadaan gen target pada bakteri, kultur bakteri, transformasi dan kokultivasi, eliminasi hingga konfirmasi keberadaan gen target pada kalus menggunakan PCR dan metode SDS-PAGE. Parameter yang diamati antara lain morfologi kalus, Konfirmasi keberadaan GFP, dan elektroforesis hasil amplifikasi gen target melalui PCR. Hasil penelitian yang diperoleh bahwa kalus mengalami perubahan warna dan tekstur selama proses transformasi yang mana kalus mengalami browning akibat stress dan nekrosis akibat infeksi oleh bakteri A. tumefaciens yang mampu menurunkan kemampuan regenerasi kalus. Hasil konfirmasi keberadaan GFP pada ekstrak protein kalus melalui metode SDS-PAGE diperoleh 1 kalus positif mengandung protein heptapeptide pengkode gen antihipertensi ditandai keberadaan GFP dengan pita yang tereksitasi oleh gelombang cahaya biru dari Gel doc.