Konstruksi Fusi Protein Rekombinan Glucagon-Like Peptide-1 dengan ABD094 pada Plasmid pET28a untuk Ekspresi Tinggi di Eschericia coli

Abstract

Diabetes melitus (DM) merupakan penyakit metabolik kronis yang ditandai dengan peningkatan kadar glukosa darah yang disebabkan oleh ketidakmampuan pankreas untuk memproduksi insulin dalam jumlah yang cukup atau terjadi resistensi insulin pada tubuh. Kadar glukosa yang tidak terkontrol dapat menyebabkan komplikasi akut serta kronis sehingga dibutuhkan terapi yang dapat mengontrol kadar glukosa darah. Glucagon-like peptide-1 (GLP-1) merupakan hormon inkretin yang dapat meningkatkan sekresi insulin, namun GLP-1 memiliki waktu paruh yang sangat singkat akibat inaktivasi enzim dipeptidyl peptidase (DPP-IV). Peningkatan waktu paruh GLP-1 dapat dilakukan salah satunya dengan memfusikan GLP-1 dengan ADB094 yang dapat mengikat albumin. Tujuan penelitian ialah untuk mendapatkan konstruksi gen pengkode GLP-1-ABD094 yang telah dioptimasi kodon ke dalam plasmid pET28a serta mendapatkan transforman E. coli TOP10 dan BL21 yang mengandung plasmid rekombinan pET28a GLP-1-ABD094. Penelitian ini diawali dengan membuat rancangan gen GLP-1-ABD094 dengan cara memfusikan GLP-1, linker Gly4Ser, dan ABD094. Hasil rancangan gen yang dibuat kemudian dioptimasi kodon sehingga nukleotida yang digunakan sesuai dengan kodon referensi dari inang E. coli. Hasil optimasi kodon kemudian dikonstruksikan ke dalam plasmid pET28a dan kemudian ditransformasikan ke dalam inang E. coli TOP10 dan BL21. Transforman yang tumbuh dikarakterisasi dengan menggunakan PCR dan analisis restriksi untuk memastikan kebenaran keberadaan plasmid rekombinan pET28a GLP-1-ABD094.