Respon Eksplan Tomat (Lycopersicon esculentum Mill.) Terhadap Transformasi Gen SoSUT1 dengan Menggunakan Agrobacterium tumefaciens

Abstract

Gen SoSUT1 adalah gen pengkode protein sucrose transporter yang diisolasi dari jaringan daun tanaman tebu (Sacharum officinarum). Protein sucrose transporter pada tanaman tingkat tinggi berfungsi dalam translokasi sukrosa dari organ source menuju ke sink. Perakitan tanaman dengan aktivitas translokasi sukrosa yang tinggi dapat dilakukan dengan penyisipan gen SUT menggunakan metode DNA rekombinan. Pengembangan metode DNA rekombinan membutuhkan tanaman model yang mampu memberikan informasi secara luas. Tomat (Lycopersicon esculentum Mill.) merupakan tanaman model yang sering digunakan karena mudah di transformasi dan memiliki potensi organogenesis yang tinggi. Dalam penelitian ini, gen SoSUT1 dikonstruk dalam plasmid pAct yang selanjutnya di sebut pAct:SoSUT1 dan ditransformasi ke dalam Agrobacterium tumefaciens (A.tumefaciens) strain GV3101. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui respon eksplan tomat terhadap transformasi gen SoSUT1 dengan menggunakan A.tumefaciens. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai salah satu informasi dalam upaya peningkatan translokasi sukrosa pada tanaman budidaya. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Botani dan Kultur Jaringan, Fakultas MIPA, Universitas Jember pada bulan Juni sampai November 2010. Bahan yang digunakan adalah tunas pucuk (axillary buds) tomat; A.tumefaciens strain GV3101; media yeast-extract peptone (YEP), media MS (Murashige Skoog); primer F/R nptII dan 2F/2R SUT; dan PCR Master mix (iNtRON). Tahapan penelitian yang dilakukan, 1) transformasi binary plasmid pAct:SoSUT1 ke dalam A.tumefaciens menggunakan metode CaCl , 2) konfirmasi binary plasmid pAct:SoSUT1 di dalam A.tumefaciens menggunakan metode PCR dengan menggunakan primer F/R nptII dan 2F/2R SUT, 3) transformasi gen SoSUT1 pada eksplan tomat. Hasil transformasi gen SoSUT1 pada tomat dapat diketahui dengan menghitung persentase planlet yang tahan pada media penyeleksi hingga seleksi ke-5 dan persentase kemampuan planlet membentuk tunas. v

2 Hasil penelitian menunjukkan bahwa binary plasmid pAct:SoSUT1 telah terintegrasi ke dalam A.tumefaciens. Koloni bakteri yang mampu bertahan pada media YEP yang mengandung antibiotik rifampicin 100 mgL -1 dan kanamycin 50 mgL -1 merupakan A.tumefaciens transforman. Berdasarkan hasil analisis menggunakan metode PCR dengan dua pasang primer menunjukkan pita DNA pada panjang 550 bp dan 1000 bp. Respon eksplan terhadap transformasi gen SoSUT1 di dalam media MS yang mengandung antibiotik hygromycin 10 mgL

sebesar 13,2 persen dengan kemampuan membentuk tunas sebesar 21,45 persen.