Ransformasi Gen SosUT1 Mengguanakan Agrobacterium Tumefaciens dan Eksplan Tunas Lateral pada Tanaman Tebu (Saccharum spp. Hybrid)

Abstract

Sukrosa merupakan hasil fotosintesis di daun yang ditranslokasikan keseluruh jaringan tanaman (dari source ke sink). Proses translokasi keseluruh jaringan tanaman ini difasilitasi oleh suatu carrier protein yang disebut sucrose transporter (SUT). SUT merupakan suatu protein membran yang keberadaannya pada tanaman dibedakan menjadi tiga subfamily besar yaitu SUT1, SUT2, dan SUT4. SUT1 memiliki afinitas yang tinggi dibandingkan dengan SUT4, sedangkan SUT2 afinitasnya hampir tidak dapat terdeteksi. Transformansi gen SoSUT1 dilakukan pada eksplan tebu dikarenakan tanaman tebu merupakan tanaman industri utama yang sangat produktif. Proses transformasi yang digunakan pada umumnya menggunakan vector Agrobacterium tumefaciens, yang merupakan bakteri tular tanah yang mampu menstransfer bagian TDNA plasmid ke dalam genom tanaman sehingga menyebabkan penyakit crown gall.

Kemampuan

T-DNA menyisip ke dalam genom tanaman inilah yang menyebabkan beberapa peneliti melakukan rekayasa untuk menyisipkan gen of interest (SoSUT1) pada sequence T-DNA dengan menghilangkan gen pengkode penyakit crown gall. Pada penelitian ini gen SoSUT1 dikonstruk dalam plasmid pAct bakteri A. tumefaciens strain GV 3101. SoSUT1 yang diinsersikan kedalam genom tebu diharapkan akan mampu meningkatkan akumulasi sukrosa yang lebih tinggi pada batangnya (sink). Penelitian ini dilakukan di Laboratorium BIOSAIN Politeknik Negeri Jember dan Laboratorium Biologi Dasar, Fakultas MIPA, Universitas Jember pada bulan Agustus 2010 sampai Januari 2012. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain; tunas lateral tanaman tebu (Saccharum spp. hybrid.) cv BL, A. tumefaciens strain GV 3101, gen SoSUT1 dalam plasmid, media YEP (yeast-extract peptone), media MS (Murashige Skoog), primer F/R hptII, dan PCR Master mix (Roche). Tahapan penelitian yang dilakukan, 1). konfirmasi binary plasmid pAct:SoSUT1 di dalam A. tumefaciens menggunakan metode PCR dengan menggunakan primer F/R hptII, 2). perbanyakan ekspalan tunas lateral tebu, 3). transformasi gen SoSUT1 pada eksplan tebu in vitro, 4). konfirmasi konstruk gen SoSUT1 di dalam genom tanaman tebu dengan menggunakan primer F/R hptII. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 1). binary plasmid pAct:SoSUT1 telah terintegrasi ke dalam A. tumefaciens. Berdasarkan hasil analisis menggunakan metode PCR dengan dua pasang primer menunjukkan pita DNA pada panjang 470 bp, 2). transformasi gen SoSUT1 pada eksplan tebu menghasilkan persentase tanaman putatif transforman sebesar 7 %, 3). konstruk gen SoSUT1 telah terintegrasi ke dalam genom tanaman tebu. Berdasarkan hasil analisis menggunakan metode PCR dengan dua pasang primer menunjukkan pita DNA pada panjang 470 bp.