KARAKTERISASI TANAMAN TEBU (Saccharum officinarum L. Var. BL) TRANSGENIK OVEREKSPRESI GEN SoSUT1 EVENT A-D

Abstract

Sukrosa merupakan produk utama fotosintesis yang dihasilkan dari proses asimilasi karbon. Sukrosa disintesis di sitosol yang dikatalisis oleh enzim Sucrose Phosphate Synthase (SPS). Sukrosa yang dihasilkan ditransport ke organ penyimpanan dan digunakan sebagai sumber energi untuk pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Transport sukrosa tersebut difasilitasi oleh protein Sucrose Transporter (SUT) yang terletak di membran sel. Besarnya kandungan sukrosa pada organ penyimpanan salah satunya dipengaruhi oleh tingkat transportasinya. Aktivitas transport sukrosa merupakan hal penting untuk memindahkan sukrosa dari organ fotosintesis (source) ke organ non fotosintesis (sink). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakter pada tanaman tebu transgenik overekspresi gen SoSUT1, yang berhubungan dengan ekspresi gen SoSUT1 yang terinsersi ke dalam genom tanaman tebu. Karakterisasi yang dilakukan meliputi analisis DNA genom dengan PCR, analisis protein SUT1 dan SPS1 dengan western blot, dan analisis kandungan sukrosa. Konfirmasi keberadaan gen SoSUT1 pada tebu transgenik dilakukan menggunakan analisis Polymerase Chain Reaction (PCR) dengan menggunakan primer hygromicin phospho transferaseII (hptII), dan dilakukan pada 28 event tanaman transgenik hasil perbanyakan secara stek batang. Analisis protein SUT1 dan SPS1 dilakukan dengan metode western blot untuk mengetahui ekspresi gen SUT1 pada tingkat translasi. Pada penelitian ini juga dilakukan analisis sukrosa pada organ daun dan batang tebu, untuk mengetahui pengaruh gen SoSUT1 yang telah terinsersi terhadap kandungan sukrosa batang tebu yang merupakan organ penyimpanan pada tanaman tebu. Hasil analisis PCR dengan primer hptII menunjukkan bahwa dari semua tanaman yang dianalisis, terdapat 13 tanaman tebu positif transgenik SoSUT1 dengan ukuran amplifikasi 470 bp, sedangkan 15 tanaman lainnya menunjukkan hasil negatif. Hasil analisis western blot protein sucrose transporter1 (SUT1) terhadap 13 tanaman transgenik menunjukkan terdapat 9 event tanaman yang mengalami peningkatan kandungan protein, ditandai dengan tebalnya pita protein dibandingkan dengan kontrol. Analisis protein sucrose phosphate synthase1 (SPS1) menunjukkan bahwa tanaman transgenik memiliki kandungan protein yang cenderung sama dengan kontrol. Hasil analisis sukrosa daun menunjukkan bahwa pada semua event tanaman transgenik memiliki persentase kandungan sukrosa lebih rendah dibandingkan tebu kontrol. Hasil analisis sukrosa batang pada ruas ke 3 dan ke 8 mengalami peningkatan persentase kandungan sukrosa apabila dibandingkan dengan tanaman kontrol.