EFEKTIFITAS TRANSFORMASI GEN SoSPS1 MENGGUNAKAN KONSTRUK PLASMID pSMAB-SoSPS1 DENGAN EKSPLAN TUNAS LATERAL PADA TANAMAN TEBU (Saccharum officinarum L.)

Abstract

Sucrose phosphate synthase (SPS) merupakan enzim yang berperan penting dalam biosintesis sukrosa dan berpengaruh terhadap akumulasi sukrosa pada tanaman. Aktivitas SPS mempengaruhi peningkatkan kandungan sukrosa pada tebu. Upaya peningkatan kandungan sukrosa pada tebu dapat dilakukan dengan cara overekspresi gen SPS menggunakan vektor Agobacterium tumefaciens. Transformasi gen SoSPS1 dilakukan menggunakan konstruk plasmid pSMAB-SoSPS1 dengan promoter RUBQ2 dengan eksplan tunas lateral. Penggunaan promoter RUBQ2 dikarenakan efektif digunakan untuk transformasi pada tanaman monokotil. Penggunaan eksplan tunas lateral dapat menghindari variasi somklonal, waktu regenerasi lebih cepat serta dapat meningkatkan efisiensi transformasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektifitas transformasi gen SoSPS1 menggunakan konstruk plasmid pSMAB-SoSPS1 dengan eksplan tunas lateral pada tebu (Saccharum officinarum L.). Tahapan penelitian ini meliputi: infeksi, eliminasi, seleksi, pengakaran, aklimatisasi, isolasi DNA genom dan analisis polymerase chain reactions (PCR) dengan pasangan primer bar (forward) dan bar (reverse) yang memiliki ukuran 462 bp. Tanaman putatif transforman yang didapat sebanyak 18 tanaman untuk selanjutnya diaklimatisasi. Keberhasilan aklimatisasi sebesar 70% yaitu 12 tanaman dari 18 tanaman. Dari 12 tanaman yang berhasil diaklimatisasi kemudian dilakukan analisis PCR dan hanya didapatkan 1 tanaman transforman. Hal ini ditandai dengan adanya pita DNA yang teramplifikasi pada ukuran 462 bp. Adanya hasil analisis PCR menunjukkan bahwa efektifitas transformasi gen SoSPS1 menggunakan konstruk plasmid pSMAB-SoSPS1 dengan eksplan tunas lateral sebesar 2%. Dibandingkan dengan efektifitas menggunakan konstruk plasmid pKYS-SoSPS1 sebesar 4% dan pCl4-SoSPS1 sebesar 12%, efektifitas transformasi gen SoSPS1 menggunakan pSMAB-SoSPS1 masih rendah.