Uji Sitotoksisitas dan Apoptosis Ekstrak Kloroform Daun Kayu Kuning (Arcangelisia flava L. Merr) terhadap Kultur Sel Kanker Kolon WiDr In Vitro

Abstract

Kanker menjadi salah satu penyebab kematian utama dengan jumlah penderita yang terus bertambah setiap tahun. Kanker kolon menduduki urutan insiden ketiga dengan angka kematian mencapai 690 ribu jiwa. Pengobatan kanker secara konvensional dilakukan dengan pembedahan, radiasi dan kemoterapi yang pada umumnya belum mampu memberikan hasil efektif, maka perlu pengembangan dan penemuan obat antikanker baru. Tanaman pada umumnya memiliki zat aktif dalam bentuk metabolit sekunder yang memiliki efek farmakologi sebagai agen kemoprevensi. Salah satu tumbuhan yang memiliki potensi untuk terapi antikanker adalah Arcangelisia flava atau lebih dikenal dengan kayu kuning karena terdapat senyawa berberin di dalamnya. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas kemoprevensi dan potensi pemacuan apoptosis ekstrak kloroform daun A. flava terhadap kultur sel kanker kolon WiDr. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratoris, menggunakan metode uji sitotoksik MTT assay dan uji apoptosis double staining method. Pada uji sitotoksik, dilakukan penanaman sel pada 96 well plate dengan kelompok kontrol dan perlakuan. Pada kelompok kontrol, sel hanya diberi media kultur, sedangkan kelompok perlakuan masing-masing diberi ekstrak kloroform daun A. flava dengan 5 seri konsentrasi yaitu 50, 100, 200, 300, dan 400 μg/ml secara triplo dengan replikasi sebanyak 3 kali. Reagen MTT ditambahkan untuk membentuk kristal formazan berwarna ungu yang kemudian dibaca absorbansinya dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm. Data absorbansi sel dikonversi menjadi viabilitas sel dan dianalisis dengan program probit untuk memperoleh nilai IC50. Nilai rata-rata IC50 dari tiga eksperimen sebesar 121,637 ± 20,065 μg/ml. Berdasarkan nilai IC50, ekstrak kloroform daun A. flava dikatakan memiliki potensi sebagai senyawa sitotoksik pada sel kanker kolon WiDr karena nilai IC50 yang didapatkan tidak lebih dari 500 μg/ml. Uji apoptosis double staining method dilakukan dengan menanam sel pada 24 well plate dengan kelompok kontrol dan perlakuan. Pada kelompok perlakuan, diberi ekstrak kloroform daun A. flava dengan konsentrasi IC50 yaitu 120 μg/ml dan 1,5 IC50 yaitu 180 μg/ml. Sel hidup akan tampak memiliki inti sel dengan bentuk normal dan berwarna hijau. Sel yang mengalami apoptosis akan memiliki inti sel berwarna oranye dengan bentuk yang terkondensiasi atau terfragmentasi. Sedangkan sel yang mengalami nekrosis akan tampak memiliki inti sel berwarna oranye namun dalam bentuk inti sel normal. Pada kelompok kontrol sel, diperoleh hasil 100% sel dalam keadaan hidup. Pada sel yang diberi perlakuan ekstrak dengan konsentrasi 120 μg/ml menunjukkan sebagian besar sel mengalami kematian dimana 67,975% mengalami apoptosis dan 4,539% mengalami nekrosis. Efek yang lebih nyata ditunjukkan oleh kelompok sel yang diberi perlakuan dengan konsentrasi ekstrak 180 μg/ml dimana hampir seluruh sel mengalami kematian yaitu 82,153% sel mengalami apoptosis dan 11,802% mengalami nekrosis. Berdasarkan hasil tersebut, dapat disimpulkan bahwa ekstrak kloroform daun A. flava memiliki potensi memicu apoptosis sel kanker kolon WiDr. Efek sitotoksik dan apoptosis ini dapat disebabkan oleh senyawa berberin yang terkandung dalam tanaman A. flava. Mekanisme berberin dalam memacu apoptosis adalah mealalui jalur ekstrinsik dengan menginduksi sinyal kematian sel serta induksi gen apoptosis.