ldentifikasi Bakleri Xilanolilik asal Mikrob Sistem Abdominal Rayap dan Overekspresi Gen Penyandi endoB-1.4-D-Xilanase sebagai Produsen Prebiotik

Abstract

Diperoleh dua jenis isolat bakteri xilanolitik (berkarakteristik putih keruh atau PK dan coktat bening aiau CB) yang belum teridentifikasi secara taksonomik berdasarkan hasil eksptorasi yrng telah dilakukan. ldentifikasi pendahuluan secara mikrobiologis menunjukkan bihwa kedua koloni mampu menghidrolisis polimer oat'spelt xylan yang ditairdai dengan terbentuknya zona terang disekitar koloni (zona halo). Terkait dengan aktir,,itas xila-nolitik yang ditunjukkan tersebut, maka identifikasi yang akan dilakukan terhadap kedua isolat -bakteri tersebut telah berlanlut pada aspek fenotipik (analisis tOS rirun;. Bakteri xitanolitik yang telah diisolasi dari sistem abdominal rayap her'lkutnya dikultivasi secara spesitik dalam medium yang mengandung xilan dan cjila:siJkan visualisasi terhadap aktivitasnya menggunakan substrat xilan. Secara kuantitatif, aktivitas enzim endo-ft1,4-D-xilanase menunjukkan aktivitas teltinggi dibanding ekso-ft1,4-D-xilosidase, a-L-arabino{uranosidase, a-Dglukuronidase. dan aselii xilan esterase; dimana masing-masing sebesar 4,78; 0,00; 1,94 2.64. dan 0,00 unit. ilada tahap berikutnya yang berupa produksi pada medium yang mengandung aat-spett xylan' dilakukan untuk memperoleh ekstrak sel-sel bakteri. Langkah identifikasi yang berlanjut secara fenotipik melalui analisis 165 rRNA meliputi isolasi dan penentua'ikonsenirasi DNA kromosom, dimana DNA kromosom telah lerisolasi Oengan konsentrasi 0,125 1tg.1tl'' dengan tingkat_kemurnian 0,7^ Berdasarkan hasil elekiroforesis diketahui bahwa terdapat pita-pita DNA koloni 7,23, dan 2a dengan pasangan basa lebih dari 10 x 103 bp. Pada tahap reaksi PCR, proses amplrfikasinya dilakulian menggunakan beberapa pasang primer yang berbeda (Batch F9 S2a. UniB 9 S2a, P-P369-tS, p-pg8g-15, Com F923, dan Com R9 23). Berdasarkan hasil analisis PCil dengan konsensus primer prokariotik tersebut, diperoleh pita DNA dergan ukuran i:asa + 5OO Op. Konsentrasi suspensi DNA ctari produk PCR hasi pemurnian menunjukkan konsentrasi sebesar 0,0625 trlg.pl 1 dengan. ting.kat <ea-:urnian 1,25' Sekuensing dan desain primer menghasilkan urutan nukleotida dan <cnstruksi gen 16 rllhlA isolat 2a maupun 23. Langkah Blast yang dilakukan be'dasarkan data s*k,.;ensing menunjukkan bahwa isolat 2a memiliki kemiripan terdekat dengan {nttrobaite. sp. dan Enterobacteriaceae bacterium (98-99'.. Primer Balch F), Enterobacter cloacae dan Enterabacter hormaechei (98-99o'". Prifiler P36), sedangkan isoiert 23 menunjukkan kemiripan terdekat dengan Runmeliibacillus stabekisii, *;.::i!iaceae bacterium, Baciltus sphaericus dan Bacitlus rusiformis (54-95%' Primer {-t;*r-n-l GC F), serta Bacitlus sp., Pontibacillus sp.. Baciitus cereus, Malobacillus sp., dat Eaciltus pseudofirmus (94-95%' PrlmerCom-ll R)'