Penentuan Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Daun Tanaman Melalui Inhibisi α-Amilase Menggunakan Speltrofotometri NIR dan Kemometrik

Abstract

Diabetes melitus adalah gangguan metabolik yang ditandai dengan tingginya kadar glukosa dalam darah (hiperglikemia). Diabetes melitus tipe 2 merupakan tipe diabetes yang lebih umum dimana jumlah penderitanya lebih banyak dibandingkan dengan diabetes melitus tipe 1 dan gestasional. Jumlah penderita diabetes melitus tipe 2 mencapai 90% dari total kasus keseluruhan diabetes melitus, biasanya ditandai dengan resistensi insulin dan defisiensi insulin relatif. Prevalensi diabetes melitus yang terus mengalami peningkatan sebanding dengan peningkatan terapi farmakologi dengan menggunakan obat hipoglikemik oral maupun insulin. Obat hipoglikemik oral dapat memberikan efek samping yang tidak diinginkan, sehingga banyak penelitian diarahkan untuk terapi menggunakan bahan alami agar terhindar dari efek samping tersebut. Pada penelitian ini dilakukan penentuan aktivitas antidiabetes menggunakan instrumen spektrofotometri near infrared karena metode analisis yang umum digunakan untuk menentukan aktivitas antidiabetes melalui inhibisi α-amilase membutuhkan tahapan analisis yang panjang dan waktu analisis yang cukup lama. Keuntungan menggunakan metode spektrofotometri near infrared diantaranya yaitu efektif, mudah, cepat, biaya penelitian ekonomis, dan bersifat non-destruktif. Penentuan aktivitas antidiabetes melalui inhibisi α-amilase dengan menggunakan metode spektrofotometri near infrared memerlukan suatu analisis data multivariat (kemometrik) agar dapat mengekstrak informasi yang dibutuhkan dari spektrum inframerah dan menggunakan informasi tersebut untuk diaplikasikan secara kuantitatif dengan menggunakan software The Unscrambler X 10.2. Beberapa teknik yang digunakan untuk pembentukan model kalibrasi (analisis kuantitatif) dalam penelitian ini yaitu Partial Least Square (PLS). Untuk menguji validitas model regresi dari model kalibrasi yang terpilih maka dilakukan validasi dengan metode validasi silang 2-Fold Cross Validation dan Leave One Out Cross Validation (LOOCV). Metode pembanding yang digunakan dalam penelitian ini yaitu metode spektrofotometri UV-Vis dengan pembanding jamu tersaintifikasi dari B2P2TOOT. Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, model PLS dengan spektroskopi near infrared memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan dengan PCR dan SVMR dengan nilai R 2 kalibrasi 0,9802943; R2 validasi 0,9786547; RMSE kalibrasi 0,6606693; dan RMSE validasi 0,6925296. Validasi model yang dilakukan menghasilkan nilai yang baik dengan R2 2-Fold Cross Validation 0,9910494; sedangkan untuk nilai R2 kalibrasi dan R2 validasi Leave One Out Cross Validation (LOOCV) masing-masing sebesar 0,9809417 dan 0,9794762. ix Model kalibrasi PLS yang terbentuk dan tervalidasi kemudian diaplikasikan pada sampel nyata. IC50 sampel nyata yang didapat dari spektrofotometri NIR untuk sampel dengan kode AA yaitu sebesar 1092,879 ± 2,862 µg/mL; sampel dengan kode AB yaitu sebesar 1261,623 ± 0,710 µg/mL; dan sampel dengan kode AC yaitu sebesar 1252,662 ± 0,314 µg/mL. Hasil yang didapatkan tersebut kemudian di uji dengan analisis uji statistik dengan Uji T Dua Sampel Berpasangan dengan metode pembanding spektrofotometri UV-Vis. Nilai signifikansi yang diperoleh untuk sampel nyata dengan kode AA, AB dan AC berturut-turut yaitu 0,020; 0,185; dan 0,006 dengan tingkat kepercayaan 99% sehingga, dapat disimpulkan bahwa kadar IC50 yang didapat dari kedua metode tersebut pada sampel dengan kode AA dan AB tidak memiliki perbedaan yang bermakna sedangkan pada sampel dengan kode AC memiliki perbedaan yang bermakna.