PRODUKSI ARTIFISIAL PEPTIDE ANTIHYPERTENSI MELALUI EKSPRESI GEN Gg-Ah3 PADA E. Coli SEBAGAI UPAYA PENGEMBANGAN BAHAN NUTRACEUTICAL KOMERSIAL BERBASIS PROTEIN

Abstract

Hipertensi adalah masalah serius yang dihadapi oleh masyarakat dunia termasuk Indonesia. Penanganan yang sulit akibat dari kompleksnya gejala, komplikasi dan keadaan atau penyakit yang mendasari hipertensi, mengakibatkan penggunaan lebih dari satu macam obat (polifarmasi) secara bersamaan dilakukan. Akan tetapi terjadinya interaksi obat yang berbeda tidak jarang mengakibatkan efek samping yang cukup berbahaya. Oleh sebab itu diperlukan suatu upaya pencarian suatu obat alami yang mampu untuk mempertahankan atau meningkatkan sistem fisiologis pada tubuh terutama ditujukan untuk pencegahan atau pengobatan terhadap hipertensi. Pengunaan senyawa alami biofungsional protein sebagai nutraceutical merupakan suatu pilihan dikarenakan kespesifikanya dalam fungsi fisiologis. Melalui penelitian sebelumnya (Ristek-SINas 2012-2013 dan Dikti-Stranas 2013-2014) telah ditemukan sumber material antihipertensi dari protein biji melinjo (Gnetum gnemon) berupa peptida yang mampu menghambat aktivitas enzim Angeotinsin-converting enzyme (Gg-Ah3). Penemuan urutan peptide Gg-Ah3 oleh Siswoyo et al., (2014) merupakan penemuan dasar terpenting dalam upaya memproduksi artifisial peptida. Sumber material pengkode gen Gg-Ah3 inilah, yang dalam usulan penelitian ini dikembang kearah produksi artifisial peptida melalui teknik kloning gen pada E.coli kearah komersialisasi bahan nutraceutical yang berbasis protein. Kedepannya kebutuhan akan bahan komersial nutraceutical berupa peptida antihipertensi dapat terpenuhi secara cepat, dan upaya membantu pemerintah dalam pemecahan masalah nasional terutama dibidang kesehatan dalam penyediaan bahan antihipertensi yang aman, murah dan ekonomis dapat terpenuhi. Dalam hasil penelitian tahun 1 ini telah dilakukan kegiatan sesuai dengan rencana tahun pertama (100%) yaitu 1) telah diturunkannya urutan asam amino Gg-Ah3 (CMYLASG) ke urutan basa DNA (TGTATGTACCTCGCCTCCGGG), 2) design untuk melakukan sintesa cDNA Gg-Ah3 pada plasmid pBHA, 3) Kloning gen cDNA Gg-Ah3 pada plasmid pBHA menggunakan e.coli DH5 dan mengkonfirmasi keberadaan cDNA Gg-Ah3 menggunakan PCR picking positif colony dengan primer pBA_F/pBH_R, 4) Kloning design vektor cDNA-Gg-Ah3 ke plasmid ekspresi pET28a konfirmasi hasil cloning menggunakan PCR picking positif colony pada media canamycin dengan primer yang digunakan adalah pBA_F/pBH_R diperoleh band target pada berat molekul yang sangat rendah. Keberhasilan tahun pertama merupakan dasar penting untuk keberlanjutan tahun ke 2.