ISOLASI PROMOTER GEN CARBONIC ANHYDRASE (CA} PADA Amaranthus viridis (TIPE PHOTOSINTHESIS C4)

Abstract

Carbonic Anhydrase (CA) (EC 4.2.1.1) adalah ensim yang mengandung Zn yang mengkatalis secara bolak balik reaksi antaraCO2 + HzO ----- HCO3- + H CA tersebar pada eukaryot seperti verlebrate dan tanaman. untuk : -:. a ryotik seperti archebacteria dan eubacteria. Ensim ini dapat : , as <asikan tiga gen famili yaitu CA atfa. beta dan gama {Hewet-Emmett dan -=s- an 1996) Pada tanaman Ca, CA mengkarversi CO2 meniadi HCOs dalam mesofil" 3 " a-:crat dan phosphoenol pyruvate (PEP) bersamaan dengan PEP :ET,:xiiase (PEPC) untuk membentuk asam Ca (oksaloaeetat) yang kemudian r "t-,='si menladi aspartatdan malat dalam bundle sheath cell dan mengalami r,i," i-E.o(silasi dengan menqeluarkan COz untuk bergabung dengan riboluse : ::*:scrate (RUBP) dalam siktus Cr. CA merupakan ensim pertama dalam Si. *S :anaman Ca. Penelitian Tahun ll bertujuan mendapatkan fragmen cDNA CA dari ':-a*a:'l bayam rala (Amaranthus vmdis) yang telah disequensing dan diketahui . e€€iaran nya. Urutan nukleotida tersebut digunakan untuk mendesain primer (: e-ar <iri (reverse) dan digunakan mengamplifikasi ujung limanya (5' end). Totat RNA digunakan dalam pembuatan single strand cDNA :.s:DNA) sebagai templet untuk PCR. Primer didesign dari bagian homologi ::E - cagian konservatif pada tingkat asam amino dengan menggunakan :"3:-e'o€ CA dari F. bfdentis, F. pinglei dan Licopersicum esculentum. .3,* -aian diturunkan menladi primer yaitu Forward (5' GCA TGC TCT GAT : Kcnsentrasi total RNA sebesar 15,76 ug/ul dengan kemumian 1,90. Hasil : I = :e:upa fragmen cDNA CA sekitar 375 bp. Setelah disequensing didaoati lhrd{at homologi dengan F. Bidentis sebesarS5o/o, dengan F pringteisebesar 82, &ngan L. Esculenfum sebesar 88o/o dan dengan spinach sebesar gia/o. Stretegi lain metakukan analisis PCR dengan menggunakan primer yang ffesain dari fragmen yang sudah diketahui sequennya kearah reverse (LR) dan df'aeangkan dengan Pl yang didesain dari bagian promoter CA MAVACS dari F bklentis. Hasil PCR didapati fragmen DNA sekitar 3000 bp diharapkan ruupakan promotor CA dari A. Viridis.